1 . 取材

　　取材的好壞（huài），直（zhí）接影響切片的質量。醫生在取材時，首先要有一把（bǎ）鋒利的取材刀，在切割組織時要避免取材刀來回拖拉，切取的組織塊厚薄要均勻，一般（bān）厚（hòu）度以（yǐ）0.2 ～0.3cm 為適，較容易發脆的組織如甲狀腺、肝髒、血塊、淋巴結、大塊癌（ái）組織等可適當厚一點，而脂肪組織、肺組（zǔ）織、纖維性腫（zhǒng）瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應取薄一些;淋巴（bā）結應修掉（diào）兩側球冠，並盡量剔除周圍的脂（zhī）肪組織。在取材（cái）中還應十分注意組織內是否有縫（féng）線或骨組織，如碰到不（bú）可避免的鈣化組織，應（yīng）與技術室（shì）講明，在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸道（dào）時，應注意纖維及（jí）肌（jī）肉的（de）走向，取材時盡（jìn）可能按與纖維平行走向切取為佳。

　　2 . 固定

　　固定是技術室工作的***步，也是在（zài）整個製片過程中無（wú）法補救的一步。所謂“固定”，就是組織離體後（hòu），用各種辦法使其細（xì）胞內的物質盡量接近其生活狀態時的形態結構和位置的過（guò）程。固定的目的是為了防止組織細胞自溶與***，防止了細胞內的酶對蛋白質的分解作用，使細（xì）胞內的各種成分如蛋（dàn）白質、脂肪、碳水化合物或酶類轉（zhuǎn）變為不溶性物質，以保持（chí）原有的結構與生活時相仿。另外，組織固（gù）定後，均呈（chéng）一定的（de）硬化狀態，增加組織韌性，而且不易（yì）變形，有利於以後的組織處理。所（suǒ）以組織一（yī）旦離體必（bì）需及時固定，固定液的量應為組織的5 倍。固定的關鍵主要與固定的及時性、固定液（yè）的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時間有關。***常用的固定液為10%***。筆者認為，10%***由於受到***的質量、使用時的（de）揮發和取材時帶入的（de）水分影響，濃度被（bèi）降低（dī）致組織固定不足，而高濃度的（de）***，降低了對組織的穿透性，形成周圍固定（dìng）好而中央固定不到的現象。通過實踐，本人認為以酸性12～15%的******佳。大標本(2cm 厚（hòu）)一般需要6～12個小時，小標本一（yī）般需要3～6 個小時;當室溫低18℃時，可在37℃以（yǐ）下的溫箱內加溫4～6 個小時。由於HE 染色（sè）***佳著色（sè）PH為3.5～4.5, 中性***對蘇木素染色有一定（dìng）影響,細胞核容易發灰,核染色質不佳。

　　所以, 盡管中性***對抗原有很好的保（bǎo）存作用，但酸性（xìng）***對（duì）絕大多數抗原（yuán）來說也（yě）有很好的保存作用，所以（yǐ）在沒有特別處理的情況下常規HE 用12～15%酸性***也（yě）可以(每100毫升

　　12～15%***液內加5毫升冰醋酸)。骨髓（suǐ）、結締組（zǔ）織固（gù）定（dìng）以Bouin 液（yè）為（wéi）佳（jiā），經Bouin 液固定後的組織（zhī）必須流水衝（chōng）洗4 小時以（yǐ）上。有條件的單位可根據不同要求選用二（èr）種（zhǒng）或二種以上的固定液;少數單位還可建立組織冷凍庫，以便適應各（gè）種特殊的處理要求。

　　3. 水洗（xǐ）

　　固（gù）定後水洗(10～20 分鍾)，通常被很多人所忽視，而水洗不徹底，容易造成脫片（piàn）和染色不鮮豔。對需做免疫組（zǔ）織化學的組織，更不應當忽視。***不利於組織（zhī）塊內抗原（yuán）的保存。

　　4 . 脫水和透明

　　所謂脫水就是利用脫水劑將組織內的水分置換出來（lái），以利於（yú）有機溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。

　　脫水是否徹底，直接關係到組織是否能充分透明，而脫（tuō）水（shuǐ）過度(原因是組織在純（chún）酒精內時間過久，發（fā）生組織質地（dì）發生變（biàn）化)容（róng）易造成（chéng）組織發脆。造成組織發脆的原因還有加（jiā）溫(溫度（dù）超過 35℃)、脫（tuō）水劑內加有丙酮、浸（jìn）蠟用的石蠟中二甲苯（běn）過多等等。一般9.1免费看片總認為組（zǔ）織發脆跟高濃（nóng）度酒（jiǔ）精有（yǒu）關，而忽視了與低濃度的酒精（jīng）關係，其實低濃度的酒精具有強大的穿透（tòu）力，比純酒精更容易滲透到組織塊內部使之脫水，組織如果在低濃度酒精裏充分脫水，在高濃度酒精裏隻需（xū）脫去從低濃度到高（gāo）濃度之間的水份，因此（cǐ），僅需短時間就可完成，如果這時不縮短純酒（jiǔ）精的時間，便會（huì）引起組織發脆;如（rú）果脫水時加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮（suō），並影響免疫（yì）組織化學的標記。為了使石蠟浸入到組織塊內，必須經過一種既能與脫水劑混合，又能與石蠟相溶的媒介（jiè）物質，這個過程稱（chēng）透明。目前***好的透明劑（jì）是二（èr）甲苯。

　　很多人認為二甲苯極（jí）容易使組織發脆，這個觀點很片麵，在常溫下，如果不是時間（jiān）過長（zhǎng）(超過24 小時以上)二甲苯並不會引起組織（zhī）過（guò）份發脆，相反會使某些組織結構比較質韌的組織：比如子宮肌瘤等相當好切)，但是（shì）當二甲苯溫度超過 35℃以（yǐ）後，極易引起組織（zhī）發脆。所以（yǐ）本人認為，大小標本***好分（fèn）開脫水（shuǐ），一般情況下，大標本脫水時間(室（shì）溫18℃)以80%酒精2 小（xiǎo）時、95%酒精(2道)各1個半小時至2 小時、純（chún）酒精（jīng）(3道)各1個半小時至（zhì）2 小時，二甲苯(2道)各30-60 分鍾為宜;小（xiǎo）標本脫（tuō）水時間應相應縮短。脫水時間長短，與室（shì）溫高低有密切的相關。9.1免费看片（men）在實（shí）踐中發現，室溫在12～15℃時，可作為一個臨界溫度範圍。當室溫高於此（cǐ）溫度範圍時，組織容（róng）易（yì）脫水，可適當縮短脫水時間;而室溫（wēn）低於該溫度範圍時，應適當延長脫水時間(如能保證在一個恒定的溫度下***佳)。更換（huàn）試劑，應以量為基礎，定量更換，不能等到切（qiē）片不好時再（zài）去更換。否（fǒu）則，至少會有2～3批組織（zhī）切片不好。根據我科經驗，如試劑用量為500ml，每500個蠟塊更換一次為宜。

　　5. 浸蠟

　　組織（zhī）透明後，在熔（róng）化的石蠟內浸漬（zì）的過程稱為浸蠟（là）。用其他浸透劑(如火棉膠、明膠（jiāo）等)滲（shèn）入組織內部的過程可稱為浸透或透入。浸（jìn）蠟溫度過高(超過 60℃)，在蠟內加入二甲苯蠟或由於透明時帶進的二甲（jiǎ）苯（běn）過多，都會導致組織（zhī）發硬，還會使組織內的抗原（yuán）受到破壞;所以作者主（zhǔ）張浸蠟用的石蠟熔點在56℃(三道)，***道：石蠟（là）30 分鍾;第二道：石蠟90 分鍾;第三（sān）道：石蠟（là），90 分鍾。浸蠟溫度控製在56～58℃左（zuǒ）右。(***道也可用硬（yìng）脂酸（suān）石蠟1：3混（hún）合浸蠟，不僅可軟化組織，特別適用於比較韌、硬的組織，而且由於硬脂酸是弱酸性的，對細（xì）胞（bāo）核有媒染作用，核漿比鮮（xiān）明（míng），但容易脫片;同時對疏鬆組織容易散片)。有條件的可以每天打開***道石蠟的蓋子，讓二甲苯揮發。浸蠟所用的石蠟如有雜質盡（jìn）可能過濾，以防附在組織上，造成切片刀刀口受（shòu）損，或切片破碎和劃痕增多。

　　6. 包埋

　　用包埋劑來支持組織的過程稱包埋。***常用的是石蠟包（bāo）埋法。包埋的關鍵一是平整，二是方位。要求在包埋時，應采用鑷子輕壓組織塊（kuài）拱起部份，使之平貼於底部，通常采用組織的***大麵包埋。囊壁、管腔組織應（yīng）豎直包埋。小塊多顆組（zǔ）織，應盡量放在一起，並保證在一個平麵上。修去兩邊的餘蠟(所謂的兩邊，指切片時與切（qiē）片刀垂直（zhí）的兩側)。包埋時還應注意有無縫線，紙絮（xù），如有一定要去（qù）除。

　　胃黏膜活檢標本（běn），不能按一（yī）般的規律取***大包埋麵，應采取窄麵豎（shù）起包（bāo）埋。包埋的蠟更應過濾，留（liú）有雜質的石蠟，容易（yì）造（zào）成汙染或刀口受（shòu）損。蠟的熔點（diǎn）應在56～58℃之間選擇，不提倡在冬（dōng）天使用軟蠟。

　　因為用（yòng）軟蠟包埋的蠟塊，到了夏天，會粘（zhān）在一（yī）起，不利於資料的保存，而且即（jí）使在冬天，用硬蠟包埋的蠟塊也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切（qiē）。

　　7. 磨刀

　　要想切好一張切片，首先要有一把鋒利的（de）切片刀。磨刀（dāo）是從事切片技術人員的（de）一項***基本技術，刀磨的（de）好壞，直接關係到切片的質量。磨刀的手法各人不同，但都要求用力均勻，使刀口和磨刀石全麵接觸，兩手的用力點應在刀（dāo）口上，而不是在刀背上。切片刀應用一次磨一次，每次僅需10～15分鍾，過（guò）長時間的磨刀，容易把已經磨出（chū）的鋒刃磨掉，檢查切（qiē）片刀是否鋒利，用手試摸刀（dāo）口的方法並（bìng）不十分科學，不僅不能證明切片刀是否真正鋒（fēng）利，而且容易損（sǔn）害刀口，***簡單的辦（bàn）法（fǎ）是每次磨好後拿一（yī）個蠟塊試切（qiē）一下。每次磨好刀後，應將磨刀石（shí）用蓋子蓋好，以防灰塵掉在磨刀石（shí）上，用有灰的磨刀石磨刀，會使切片刀產生（shēng）許多細小的缺口。現在很多單位都買了磨刀機，磨刀機用來開刀鋒和磨缺口的確不錯，但（dàn）由於磨刀的角度和時間不易精確掌（zhǎng）握，故（gù）效果並不理想。根據9.1免费看片的經（jīng）驗，真正的鋒刃很難用（yòng）機器磨出來。一次性刀片在很大程度（dù）上解決了這個問題。如用一次性刀（dāo）片，必（bì）須及時更換刀口。一（yī）個刀口切小標本不應超過（guò）20～25 隻蠟塊，切大標本不應超（chāo）過10～15隻蠟塊。

　　8. 切片

　　切片的***步必需粗切。粗切的厚度大約在50～100微米左右，質（zhì）地較硬的組織或（huò）較小的組織應再薄一些，粗切（qiē）致組織（zhī）全部暴露後，才進行細切。細切至組（zǔ）織塊表（biǎo）麵均勻一致，無白點後，再（zài）把切的蠟片放入（rù）溫水中。切（qiē）片時要求用力均勻、柔（róu）和（hé），搖速（sù）不易過（guò）快或過慢。過快會導（dǎo）致切片（piàn）厚薄不均，機器磨（mó）損;過慢會使切片增厚。切片厚度（dù）一般為3～5微米（mǐ）。切片的要求（qiú）是完整、薄、均勻。切下的片膜其大小形狀應與組織塊（kuài）一致，切片的不完整，常會將重要（yào）病變遺漏，導致誤（wù）診、漏診。在切（qiē）片放蠟塊時，應注意組織包埋的（de）方向，組織的層次，纖維、肌肉等的走向應與切片刀平行，較難切的部分（fèn）應放在上麵，如皮膚的表皮（pí），腫塊的包膜，胃腸道的漿膜等，這樣可以減少組織的斷裂現象。操（cāo）作切片機時應用力均勻，避免用力過重。對脫鈣組織、骨（gǔ）髓（suǐ），以及已知的鈣化組織，應選（xuǎn）用固定的刀口，以減（jiǎn）少其他部位出（chū）現缺口的可能性。在使用毛筆（bǐ）展片時要防止筆絲進入（rù）刀（dāo）口，因為每切到一（yī）根筆絲，就會增加一個缺口。切片厚度一般為4～6微米，有人認為：隻要切片（piàn）機（jī）刻度標著幾個微米，切出來的片子就是幾個（gè）微米（mǐ）。其實不然，當切片刀不鋒（fēng）利，或切片時速度不勻，或切的較慢時，切的片子都會變厚，隻有在切片刀十分鋒利、切片勻速的情況下，才能真正保證其（qí）厚（hòu）度。

　　下麵是（shì）切片時碰到的問題的原因（yīn）

　　及可能處理的方（fāng）法：

　　(1)組織（zhī）發脆（cuì）：一般是脫水、透明（míng）、浸蠟時間過長、溫度過高，並與組織本身質地也有關，在切片時，邊（biān）切邊用嘴向蠟片吹氣，可能會好些。

　　(2)切片卷起，可能是刀不鋒利，或刀鋒在另一麵，或刀（dāo）角度過大，切片太厚等等（děng）。

　　(3)蠟（là）片彎曲：可能是（shì）刀鋒不均，切片刀未磨直，切片刀與蠟塊不平行。

　　(4) 透明、浸蠟時間過長、溫度過高，並與組織本身質地也有關

　　(5)厚（hòu）薄不均：可能是刀、刀座及蠟塊未夾緊，組織太硬，或切片（piàn）機主軸太向前，或切片機已磨（mó）損。

　　(6)切片出現裂痕：可能是刀有缺口，石（shí）蠟內有雜質，組織內有鈣（gài）化、骨片或（huò）有線結, 也可能會有棉紙纖（xiān）維等。

　　(7)切片（piàn）不（bú）連片，切不下片，切片很厚，或（huò）者切片後蠟塊發（fā）白，內陷：組織脫水不佳。補救辦法：可先將蠟塊溶解，取出組織，放（fàng）入加熱水浴的丙酮內(80℃)，30～60 分鍾，再進行透明浸蠟包埋切片，也許會好一點。

　　9. 展片與撈片

　　展片水溫應在42℃至47℃之間，這主要和包埋蠟的熔點有關,水溫過高，會引起組織（zhī）細胞散開，水溫過低（dī），切片皺摺無法攤平。包埋蠟中如有二甲苯，也會造成石蠟溶解現（xiàn）象。而用一次性刀片切的片子，一碰到熱水，片子上的皺摺就無法再展開，這有二個方法可以解決（jué）：***、可（kě）以在切片時邊切邊向蠟片吹（chuī）氣（qì），這樣的片子就會非常平整，放到熱水裏就會自然展開（kāi），比較方便快捷，但這樣的片子會略微厚一點;第二、在切完片子後，先把（bǎ）切片放在 30%酒精水（shuǐ）溶液中，讓酒精的（de）張力自動把皺摺（zhé）展開，然後（hòu）再將切片移到熱水（shuǐ），這樣（yàng）的片子會較薄;如酒精濃度過高，容易引起切片破碎，出現裂隙，像脂肪之（zhī）類細胞間粘附性較小（xiǎo）的組織一（yī）碰到酒（jiǔ）精就會散開，故不能用（yòng）此法。***後撈片時玻片要幹淨，要選擇那些完整、無皺摺的切片，粘貼於玻片中1/3和下1/3 的（de）中間。

　　10. 烤片（piàn）和脫蠟

　　烤片，一般在60℃的溫（wēn）箱內烤片（piàn）0.5～1小時（shí）左右，溫度過高，會引起切片細胞收（shōu）縮;時間太短(少於20 分（fèn）鍾)，容易造成脫片（piàn）。脫（tuō）蠟也相當重要，如果脫蠟不（bú）幹淨，切片（piàn）不易著色或著（zhe）色（sè）不勻，所以，脫蠟用的二甲苯要經常更換（huàn），一般用3道二甲苯，每500ml 液體，處理（lǐ）500 張切（qiē）片後更換一次為宜。

　　當室溫低於18℃時，必（bì）須將切片從溫箱（xiāng）拿出（chū）後立即放入二甲苯中脫蠟，或（huò）將二甲苯放入溫（wēn）箱內預熱(37℃左右)脫蠟，***高（gāo）不得超過60℃。然後經高濃度（dù）的酒精到低濃度的（de）酒精（jīng）洗去二甲苯（běn），至水。

　　11. 染（rǎn）色

　　蘇木素（sù）染色時間要根據染料的新舊、溫（wēn）度、切片的類型而定，一般為5-15分鍾。經水略洗後（hòu），用鹽酸酒精分化，分化程度必須用顯微鏡控製。分（fèn）化水洗後，可用溫水或自來水藍化，並充分水洗 (流水衝（chōng）洗5分鍾以上)，以防鹽酸殘留導致切片褪色。9.1免费看片不提倡使用堿性溶液(釋（shì）氨水、肥皂水等)促（cù）藍，盡管藍化效果很好，但從實踐的結果來看，用堿性溶液促藍的切片不能長期保存，容（róng）易褪色。***後（hòu）入伊紅複染(5-20秒)。HE 染色的關鍵在於深淺適度，對比鮮明，一般有經驗的，肉眼就能（néng）判斷，但偶而也會出現失誤，所以用顯微鏡控製是***保險的方法。其關鍵的步驟在於蘇木素染（rǎn）好後的分化及藍化過程，在藍化結束後，應在顯微鏡下觀察細胞核著（zhe）色是否合適，核結（jié）構是否清晰，胞漿內是否有殘留的蘇木素等等。染色理想的切（qiē）片在顯微鏡（jìng）下應是：細胞核與細胞漿應藍紅相映，鮮豔美（měi）麗;核漿（jiāng）對比明顯，核（hé）膜及核染色質顆粒清晰可見。

　　12. 脫水和封片

　　切片脫水應從低（dī）濃度的酒精到高濃度的酒精，80%酒精1 道，95%酒精（jīng）2 道，純酒精（jīng）2 道，(正丁醇1 道)，二甲苯2道。濃度低的酒精比濃（nóng）度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅退色，故脫水時間（jiān）可短一點，每道3-5 分鍾，純酒精每道10分鍾。為增加（jiā）酒精與二甲苯的相融性，可在二甲苯前麵增加一 道正丁醇;石碳酸-二甲苯液也有此效，但用石碳酸時如不洗淨，可引起（qǐ）切片（piàn）退色，不利（lì）於切片久存， 故不作推薦。切（qiē）片經二甲苯透明後，用中性（xìng）樹膠封固。為增加切片的透明度，防止細胞收縮、龜裂或 切片出現黑色結晶（jīng）樣小點。所以（yǐ）9.1免费看片規定切片必須濕封，不得（dé）用溫箱烤（kǎo）幹或電吹風吹幹後幹燥封（fēng）片。

　　在南方冬（dōng）春、黴雨季節，封片時（shí）要防止口鼻呼出的氣體接觸到切片;在天氣較潮濕的日子裏，不宜一 次將（jiāng）多張切片取出（chū）待封，以免切片“還潮”，形成透明不佳,出現雲霧狀水珠。脫水劑（jì）的更換（huàn）也應有（yǒu）一 定的時間（jiān）規定。一般是每500ml 液體，處理500 張切片後更換一次為宜。封片樹膠（jiāo）不能過稀，封片時樹膠要均勻充滿蓋玻（bō）片且樹膠不及外溢為佳。要將組（zǔ）織全部覆蓋，也（yě）不能有氣泡。***後，粘（zhān）貼標簽，標簽必須貼於玻片左側，編號書（shū）寫清楚（chǔ），***好能打印。